Os Laboratórios de Virologia e Biologia Molecular pertencentes à Divisão de Microbiologia e Parasitologia do Departamento de Análises Ambientais da CETESB são responsáveis pelas análises laboratoriais do programa de vigilância ambiental do poliovírus. Os ensaios de concentração, isolamento viral e diferenciação intratípica de poliovírus, assim com a amostragem, são acreditados pela Norma ABNT NBR ISO 17025:2017 desde 2015.
Os vírus presentes nas amostras de esgoto são concentrados por precipitação em PEG-NaCl (Shulman et al., 2006) que consiste na técnica utilizada pelo Laboratório de Referência da OMS de Israel. Para o isolamento de poliovírus em cultivo celular, são utilizadas as linhagens RD e L20B conforme procedimentos recomendados pela OMS (WHO, 2004; 2007).
A etapa de diferenciação intratípica dos poliovírus (Sabins, selvagem tipo 1 ou derivados vacinais) é realizada por PCR em Tempo Real de acordo com os ensaios descritos por Kilpatrick et al. (2014), Gerloff et al. (2018) e Sun et al. (2024). Os isolados positivos para poliovírus são encaminhados ao Laboratório de Referência Regional da OMS da Fiocruz, para identificação e confirmação dos resultados por sequenciamento Sanger (Kilpatrick et al., 2011).
Referências
Gerloff N et al. Diagnostic Assay Development for Poliovirus Eradication. J Clin Microbiol. 2018 Jan 24;56(2):e01624-17. doi: 10.1128/JCM.01624-17.
Kilpatrick DR et al. Identification of vaccine-derived polioviruses using dual-stage real-time RT-PCR. J Virol Methods. 2014 Mar;197:25-8. doi: 10.1016/j.jviromet.2013.11.017.
Kilpatrick DR et al. Poliovirus serotype-specific VP1 sequencing primers. J Virol Methods. 2011 Jun;174(1-2):128-30. 10.1016/j.jviromet.2011.03.020
S1. Supplement to the WHO Polio Laboratory Manual. An alternative test algorithm for poliovirus isolation and characterization. World Health Organization, 2007.
Shulman LM et al. Neurovirulent vaccine-derived polioviruses in sewage from highly immune populations. PLoS One. 2006 Dec 20;1(1):e69. doi: 10.1371/journal.pone.0000069.
Sun H et al. Validation of a redesigned pan-poliovirus assay and real-time PCR platforms for the global poliovirus laboratory network. PLoS One. 2021 Aug 6;16(8):e0255795. doi: 10.1371/journal.pone.0308467.
Polio laboratory manual, 4th ed. World Health Organization, 2004
